3.2. RT-PCR
3.2.1. B형 간염 진단에 활용
기존의 B형 간염 바이러스(Hepatitis B virus, HBV) DNA 정량 검사방법은 전통적인 중합효소연쇄반응(PCR) 방법을 이용 하여 핵산을 증폭한 후 최종산물을 희석하여 정량 값을 구하는 방식과 증폭 없이 핵산에 탐식자를 부착시켜 증폭된 신호를 토대로 정량 값을 구하는 것
Genomic DNA의 분리
Bacterial cell의 배양물로부터 total DNA를 준비하는 방법은 4단계로 나눌 수 있다. 가장 먼저 bacterial cell 배양물의 증식 및 수확을 한다. 이 방법은 bacteria를 배양한 뒤 centrifugation을 통해 cell의 pallet을 분리한다. 다음으로는 세포 추출물을 분리하는 단계인데 cell의 구성성분 중 필요 없는
genome라이브러리
가장 간단한 DNA라이브러리. 매개체로 전체 genome을 나타낸다.
● cDNA라이브러리
cDNA 라이브러리는 세포내의 모든 mRNA에서 다음 그림과 같은 과정
을 거쳐서, 만든 cDNA들을 모은 것.
16.2 유전공학
● 유전공학 실험의 4단계
1단계: DNA절단- 제한핵산중간가수분해효소 이용하여
2. 제한효소(restriction enzyme)에 의한 유전자의 분리
유전자 클로닝은 DNA분자를 아주 정확하고 반복적으로 절단할 것을 요구한다. 각 Vector 분자의 circle을 열어서 새로운 DNA가 삽입될 수 있도록 각 분자마다 하나의 같은 위치가 절단되어야 한다. DNA를 자른다는 것은 nucleotides를 연결하고 있는 phosphodiester b
다. Amino Acid의 Titration과 pH buffer 작용
Amino Acid를 NaOH와 같은 염기로 Titration을 하여 얻어지는 Titration Curve는 적정하는 Amino Acid의 pH buffer 작용을 잘 설명해 준다.
즉 Amino Acid의 Carboxyl기는 Weak Acid이므로 NaOH-와 같은 Strong Base와 반응하면 일정한 pH 범위 내에서 큰 pH 변화를 일으키지 않는 pH Buffer 작용을 한
genomic DNA와 같은 아주 큰 DNA로부터 원하는 DNA 부분만을 선택적으로 증폭시킨 후 일반적으로 사용되는 agarose gel이나 polyacrylamide gel 상에서 뚜렷하게 보이는 band로 가시화할 수가 있다.
중합효소 연쇄반응을 통하여 in vitro상에서 특정 부위의 DNA를 105∼108배까지 수시간내에 증폭시킬 수 있으며, 이렇게
Amino Acid의 Titration과 pH buffer 작용
Amino Acid를 NaOH와 같은 염기로 Titration을 하여 얻어지는 Titration Curve는 적정하는 Amino Acid의 pH buffer 작용을 잘 설명해 준다.
즉 Amino Acid의 Carboxyl기는 Weak Acid이므로 NaOH-와 같은 Strong Base와 반응하면 일정한 pH 범위 내에서 큰 pH 변화를 일으키지 않는 pH Buffer 작용을 한다는
◭ Date
◭ Subject
1. PCR(Polymerase Chain Reaction): DNA를 복제•증폭시키는 분자생물학적인 기술.
2. PCR이 끝나면 전기영동(agarose gel electrophoresis)을 실시하여 반응산물을 확인한다.
◭ Purpose
PCR은 사람의 genome과 같이 매우 복잡하고, 지극히 미량인 DNA 용액에서 연구자가 원하는 특정 DNA 단편만
Bovine ephemeral fever virus), Cytorhabdovirus(대표적 예; Lettuce necrotic yellows virus), Nucleorhabdovirus(대표적 예;Potato yellow dwarf virus)가 있다.
㉠ general morphology
130-240nm x 70-80nm크기의 envelope이 있는 나선형 바이러스로서 전체적으로 총알모양을 하고 있으며, 음성극성의 한가닥 RNA를 genome으로 가지고 있다.
㉡ ge
1.Introduction
RT-PCR
DNA 에서는 exon과 intron이 있으므로 DNA를 template로 하는 경우에는 exon과 intron이 모두 증폭될 수 있다. 하지만 intron은 exon에 비해서 매우 크기 때문에 exon 중에 몇 개를 한꺼번에 증폭하려면 DNA로는 힘들다. 더구나 intron sequence는 일부를 제외하고는 중요성이 떨어진다고 인식되어 밝히지